美國紡織印染師協(xié)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)
AATCC 100-2004抗菌整理織物的評價(jià)

1. 目的和范圍
1.1 本方法提供了抗菌性能定量評價(jià)的操作程序?？咕砜椢锏脑u價(jià)取決于所使用材料抗菌性能。若材料僅有抑菌性能（抑制細(xì)菌繁殖），則采用抗菌處理和無抗菌處理的樣品相比較的定性方法AATCC147即可。若材料具有或應(yīng)用殺菌性能，則還須進(jìn)行定量評價(jià)。定量檢測可為抗菌整理織物及材料的應(yīng)用提供更為明確的藍(lán)圖。

2. 原則
2.1 首先采用AATCC 147對試驗(yàn)樣品和對照樣品進(jìn)行定性的抗菌性能試驗(yàn)。若呈現(xiàn)抗菌性能則可進(jìn)行定量試驗(yàn)。對試驗(yàn)樣和對照樣接種試驗(yàn)菌，培養(yǎng)后，加入定量的中和液采用振蕩方式將試片中細(xì)菌洗脫出。對洗出液進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)，計(jì)算試驗(yàn)樣的細(xì)菌減少率。

3. 術(shù)語
3.1 （抗菌劑的）活性：抗菌劑抗菌性能的量度。
3.2 抗菌劑：指能殺死細(xì)菌或影響細(xì)菌繁殖、生長以及活性（抑菌劑）的化學(xué)物質(zhì)。

4. 安全措施
注意：本安全措施僅提供相應(yīng)的信息，是試驗(yàn)輔助環(huán)節(jié)，并非必備程序。用本方法試驗(yàn)時(shí)，用戶有責(zé)任采用安全、恰當(dāng)?shù)募夹g(shù)來處理材料。必須向生產(chǎn)商咨詢諸如材料的安全性數(shù)據(jù)和其他推薦之類的特殊細(xì)節(jié)。必須咨詢并遵循OSHA（職業(yè)安全和衛(wèi)生管理局）的標(biāo)準(zhǔn)及規(guī)則。
4.1 開展定性試驗(yàn)和定量試驗(yàn)均必須是經(jīng)過微生物操作培訓(xùn)和有技術(shù)經(jīng)驗(yàn)的人。必須咨詢并遵循美國健康和公益產(chǎn)業(yè)部的《微生物學(xué)和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)范》執(zhí)行。
4.2 警告：試驗(yàn)中的某些微生物能傳染給人類并引發(fā)疾病。因此試驗(yàn)及相關(guān)人員必須采取合理的保護(hù)措施，避免傷害。穿防護(hù)服和戴防毒面罩來避免細(xì)菌的感染。
4.3 養(yǎng)成良好的試驗(yàn)習(xí)慣，在實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)佩戴防護(hù)鏡。
4.4 小心取用所有的化學(xué)藥品。
4.5 洗眼的藥水和安全性淋浴應(yīng)就近放置以備緊急使用。
4.6 試驗(yàn)前，對所有有可能受污染的樣品和材料進(jìn)行滅菌。
4.7 暴露在試驗(yàn)所用化學(xué)試劑的劑量應(yīng)控制在或低于政府機(jī)構(gòu)設(shè)立的標(biāo)準(zhǔn)（如OSHA規(guī)定的暴露極限[PEL]，參考1989年1月1日的1910.1000CFR的29。）此外，推薦采用下列規(guī)范作為暴露于氣體污染物的一般性指導(dǎo)：美國政府企業(yè)衛(wèi)生專家大會(huì)（ACGIH）的閾限值（TLV），包括時(shí)間加權(quán)平均閾限值（TLV-TWA）和短時(shí)間接觸閾限值（TLV-STEL），上限值（TLC-C）等。

5．限制
5.1 定性試驗(yàn)是相對快捷、方便測定織物殘余抗菌性能的方法，可參考AATCC 147織物抗菌性能評價(jià)：平行劃線法。

6．試驗(yàn)菌種
6.1 試驗(yàn)細(xì)菌
6.1.1 金黃色葡萄球菌 ATCC 6538 革蘭氏陽性菌
6.1.2 肺炎克雷伯氏菌 ATCC 4352 革蘭氏陰性菌
6.1.3 也可根據(jù)需要或用途選用其他菌種

7．培養(yǎng)基
7.1 適宜的肉湯/瓊脂培養(yǎng)基由營養(yǎng)物質(zhì)、大豆蛋白和腦心浸液（肉湯）組成
營養(yǎng)肉湯：
蛋白胨（細(xì)菌蛋白）        5g
牛肉浸膏                            3g
蒸餾水                                1000ml
7.2 加熱至沸騰以促進(jìn)溶解分散，用1mol /L NaOH或更低濃度溶液調(diào)節(jié)pH=6.8±0.1(若采用脫水培養(yǎng)基成品直接配制，則不需要此步)。
7.3 量取10ml加入到常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)管（125×17mm），具塞后并在121℃、103kPa（15psi）的壓力下滅菌15分鐘。
7.4 營養(yǎng)瓊脂：加1.5%細(xì)菌用瓊脂到營養(yǎng)肉湯中，加熱至沸騰。用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH=7.1±0.1。取15±1ml放入常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)管，塞上塞子并在103kPa的壓力滅菌15分鐘（也可用1000ml硼硅酸鹽燒瓶裝來滅菌，然后從燒瓶中將其倒入培養(yǎng)皿）。
7.5 漿狀接種物（用于疏水性織物）：
氯化鈉                    8.5g
瓊脂                        3.0g
蒸餾水                    1000ml

8. 試驗(yàn)菌的保藏
8.1 用直徑為4mm接種環(huán)將菌株轉(zhuǎn)接到營養(yǎng)肉湯中，每天連續(xù)轉(zhuǎn)接不超過2周（即14代以內(nèi)，用3～14代細(xì)菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn)）。2周后，重新從保藏菌株上進(jìn)行轉(zhuǎn)接，在37±2℃（或其它適宜溫度）下培養(yǎng)。
8.2 在營養(yǎng)瓊脂或適宜的瓊脂斜面上保藏細(xì)菌，在5±1℃下保藏，并1個(gè)月轉(zhuǎn)接一次。

9．定性試驗(yàn)（推斷性試驗(yàn)）
9.1 用AATCC 147和上文的試驗(yàn)菌株來評價(jià)試驗(yàn)樣和對照樣的抑菌性能。若發(fā)現(xiàn)材料有明顯的抗菌作用，則驗(yàn)證其殺菌性能，需繼續(xù)進(jìn)行下文的定量試驗(yàn)。

10定量試驗(yàn)（確定性試驗(yàn)）
10.1 樣片制備 以下描述均指織物樣品。對于無紡布，需對本法進(jìn)行適當(dāng)修正，再進(jìn)行試驗(yàn)。
10.1.1 樣片的尺寸和形狀：將樣品裁剪成直徑為4.8±0.1cm（1.9±0.03英寸）圓片，將這些樣片置于250ml帶蓋的廣口玻璃錐瓶中。樣片數(shù)量取決于材料種類和織物結(jié)構(gòu)，以剛能吸收1.0±0.1ml菌液為標(biāo)準(zhǔn)。如約4片棉布可吸入1ml，每瓶用的樣片數(shù)須在報(bào)告中注明。
10.1.2 對照樣 與試驗(yàn)樣片同材質(zhì)但沒有進(jìn)行抗菌整理。（陰性控制）
10.1.3 樣片滅菌 本步驟為可選。滅菌方法取決于織物種類和整理方法。棉布、醋酸纖維和很多人造纖維都可用高壓法滅菌，羊毛可用環(huán)氧乙烷滅菌或間歇蒸汽滅菌。間歇蒸汽滅菌也是對某些抗菌處理損害較小的方法。如使用了滅菌方法，則須在報(bào)告中注明滅菌方式。
10.1.4 每個(gè)樣品平的接種菌液量：取1.0±0.1ml一定濃度的菌液（把24小時(shí)肉湯培養(yǎng)物稀釋得到）滴加到每個(gè)樣品上，以保證每個(gè)對照樣和抗菌試樣0接觸時(shí)間的回收活菌數(shù)為1～2×105cfu，稀釋菌液必須采用營養(yǎng)肉湯。
10.2 試驗(yàn)操作
10.2.1 樣片的接種 若使用金黃色葡萄球菌，在配制接種液前對24小時(shí)培養(yǎng)物充分振蕩，靜置15～20分鐘。將樣片分別放于滅菌的培養(yǎng)皿中，然后用微量移液器將稀釋后的菌液均勻接種到樣片上。將這些樣片在無菌狀態(tài)下轉(zhuǎn)移到廣口瓶中，蓋緊瓶蓋以防蒸發(fā)。
10.2.2 接種后（0接觸時(shí)間）盡快向?qū)φ諛?、抗菌樣以及未接種的瓶中加入100±1ml中和液。
10.2.3 中和液應(yīng)包括中和特定抗菌整理的組分，注意部分織物的PH值要求。記錄所用中和液。
10.2.4 充分振蕩1分鐘，洗脫液用水進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶荻认♂?，并將每次稀釋后的溶液接種到2份營養(yǎng)瓊脂上。稀釋倍數(shù)通常為100 、101、102。
10.2.5 一定時(shí)間的接觸培養(yǎng)。將其余未稀釋的含有接種對照樣和抗菌樣的小瓶在37±2℃條件下培養(yǎng)18～24小時(shí)。類似的，也可進(jìn)行其他時(shí)間（如1小時(shí)、6小時(shí)）的培養(yǎng)，來測定這些時(shí)間的殺菌效果。
10.2.6 接種培養(yǎng)后樣片的計(jì)數(shù) 培養(yǎng)后，分別在對照樣和抗菌樣的瓶中加入100±1ml中和液，振蕩1分鐘，用水進(jìn)行適當(dāng)倍數(shù)的梯度稀釋，并將每次稀釋后的溶液接種到2份營養(yǎng)瓊脂上。稀釋倍數(shù)通常為100 、101、102。對抗菌樣片，可能需要其他的稀釋倍數(shù)。
10.2.7 在37±2℃（或其它適宜溫度下）對各培養(yǎng)皿進(jìn)行24～48小時(shí)培養(yǎng)。

11．評價(jià)
11.1 報(bào)告每片樣品的細(xì)菌數(shù)，如經(jīng)100稀釋度培養(yǎng)得到的細(xì)菌數(shù)為“0”，則記錄為“＜100”。
11.2 根據(jù)下式計(jì)算抗菌樣片的細(xì)菌減少率。
（1）R（％）＝100（B-A）/B
其中：
R--細(xì)菌減少率（%）
A--一定時(shí)間培養(yǎng)后的抗菌樣的菌落數(shù)
B--0接觸時(shí)間抗菌樣的菌落數(shù)
（2）R（％）＝100（C-A）/C
其中：
C--0接觸時(shí)間對照樣的菌落數(shù)
如B和C相差很大，則取其中大的值。如B,C相差不大，則采用下式進(jìn)行計(jì)算：
（3）R（％）＝100（D-A）/D
其中：D＝(B+C)/2
11.3 如不能得到未處理樣品，則利用下式計(jì)算，該式考慮了對試驗(yàn)產(chǎn)生干擾作用的各種微生物的作用
Bg（%）=100[]
其中：
E-- 未接種抗菌樣的活菌數(shù)（存在的背景細(xì)菌）
F-- 未接種、預(yù)濕處理的抗菌樣在培養(yǎng)一段時(shí)間后的活菌數(shù)（培養(yǎng)后的背景活菌數(shù)）
Bg-- 背景微生物
11.4 試驗(yàn)有效的條件：應(yīng)同時(shí)滿足（1）和（2）。
（1）未接種試樣上的活菌數(shù)為0；
（2）接種培養(yǎng)后對照樣上的活菌數(shù)明顯高于0時(shí)間細(xì)菌數(shù)。此點(diǎn)僅適合于用營養(yǎng)肉湯作為稀釋液的情況。
11.5 報(bào)告抗菌樣品對各細(xì)菌的減少百分率。
11.6 是否符合標(biāo)準(zhǔn)由相關(guān)單位決定
11.7 在報(bào)告中注明稀釋液的情況

12 精度和偏差
研究（見13.9）表明在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)測試用標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基計(jì)算（SPC）的精確度如下：
（a）不同試驗(yàn)人員之間測試結(jié)果允許偏差為18%。
（b）同一試驗(yàn)人員之間測試結(jié)果允許偏差為8%。
13 參考文獻(xiàn)及注釋
13.1 美國健康部和民政局CDCNIHHS 出版社出版物。第84—8395號。（CDC）
13.2 國家局出版手冊 AGGIH Kemper Woods中心，1330
Kemper Meadow 辛辛那提 博士 45240 電話：5131742—2020
13.3抗菌蛋白胨由Difco實(shí)驗(yàn)室提供，920 圣·亨利博士 底特律 MI48201。
13.4牛肉提取物巴爾的摩生物實(shí)驗(yàn)室提供。250先令的接種環(huán) 科克艾斯維爾 MD 21030 Difco實(shí)驗(yàn)室（地址見上）或美國oxoid有限公司9017 紅牌路 哥倫比亞 MD 21045
13.5連續(xù)和精確的測試需要純的、無污染的、非突變體的測試培養(yǎng)基。
為了防止污染使用優(yōu)良的消毒技術(shù)對培養(yǎng)皿和轉(zhuǎn)移物件進(jìn)行消毒。為了避免物種突變，要嚴(yán)格遵守每月更換。通過定期制作肉塊載物片來檢測培養(yǎng)基并觀測菌落的特征類型情況。
13.6 在和織物的接觸期，如果需要穩(wěn)定態(tài)的培養(yǎng)基，就要事先準(zhǔn)備測試菌的稀釋溶液即0.85%的鹽水和適當(dāng)?shù)木忈屘幚硪骸?br style="margin: 0px; padding: 0px;"/>13.7在稀釋溶劑中加入表面活性劑能提高疏水織物纖維的潤濕性，但這種表面活性劑會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌的數(shù)量減少。通過前面的試驗(yàn)來確定使用的濃度，記錄活性劑的作用和濃度。
13.8如果用消毒蒸餾水來代替中性溶液，殺生物劑將有可能被帶走。
13.9 Peeler.J.T Leslie J.W. Messer.J.W 復(fù)制計(jì)算錯(cuò)誤分析和細(xì)菌菌落計(jì)算 J.Food Protection vol.45. 1982 238～240頁。